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ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上世紀(jì)70年代初問世 以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用 于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。
ELISA技術(shù)原理:以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底
物的催化作用相結(jié)合起來
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
3. 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
4. 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記 的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
5. 此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
6. 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量 與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復(fù)性好。
測定步驟
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。