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祝賀王老師訂購我司明膠酶譜試劑盒并發表文章成功!

更新時間:2018-04-17      瀏覽次數:1423

祝賀南京醫科大學的老師訂購我司明膠酶譜試劑盒發表文章成功!

南京醫科大學是我們公司的老客戶,之前很多老師和同學都訂購過我們的試劑盒,對于王老師取得的成

績,我們表示衷心的祝賀,也希望老師們有更多的文章見刊。

 

文章標題《綠茶多酚EGCG增強動脈粥樣硬化斑塊穩定性及其相關機制研究》

 

文章中使用我司試劑盒如下;

MMP-2&MMP-9明膠酶譜法檢測試劑盒

 

文章詳細內容如下:

*部分綠茶多酚EGCG增強高脂飲食喂養ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩定性目的:急性冠脈綜合征(Acute coronary syndrome,ACS)是指一系列臨床嚴重的急性心肌缺血性疾病,主要包括不穩定型心絞痛以及急性ST段抬高或非ST段抬高型心肌梗死。目前大量研究資料已證實,急性冠脈綜合征發病的zui主要病理生理基礎是冠狀動脈中不穩定型動脈粥樣硬化斑塊的破裂,引起冠狀動脈內急性血栓形成,繼而引起心肌嚴重的缺血、缺氧。近年來,多項臨床流行病學研究報道稱,飲用綠茶可以明顯降低冠心病的發病率。綠茶的抗動脈粥樣硬化作用主要原因是綠茶中含有大量的多酚類化合物,其中含量zui多的為兒茶素。綠茶中兒茶素主要成分包括表兒茶素(EC),表兒茶素沒食子酸酯(ECG),表沒食子兒茶素(EGC)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。在這些成分中,以EGCG含量zui豐富,活性zui強,已被證明具有多種藥理學作用和生物學特性。我們進行本研究主要目的就是為了證實綠茶多酚EGCG是否能夠增強高脂飲食喂養ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩定性并探討其可能的相關機制。方法:30只雄性ApoE缺陷小鼠(6周齡,體重18-20g)被隨機分為對照組(n=15)以及EGCG組(n=15)這些小鼠均使用含有21%脂肪以及0.15%膽固醇的高脂飲食喂養。EGCG組以及對照組分別給予EGCG(10mg/kg)或者同等劑量的0.9%生理鹽水進行腹腔注射共16周。隨后麻醉處死小鼠,取小鼠頭臂干動脈并予固定石蠟包埋。小鼠頭臂干橫切面進行HE染色以及Masson染色分別評估動脈粥樣硬化斑塊形態以及膠原含量。此外,使用免疫組織化學染色的方法分析小鼠斑塊中巨噬細胞以及平滑肌細胞成分的比例。蛋白質印跡法(Western blot)用來檢測斑塊中蛋白表達水平,明膠酶譜法用來檢測斑塊中基質金屬蛋白酶的活性。zui后,我們用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測小鼠血清炎癥因子單核細胞趨化因子-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)以及干擾素-γ(IFN-γ)水平。結果:高脂飲食喂養16周后,ApoE缺陷小鼠頭臂干動脈近端橫切面HE染色可見明顯的動脈粥樣硬化斑塊形成,提示造模成功。另外,與對照組相比,EGCG組ApoE缺陷頭臂干動脈近端粥樣硬化病變程度明顯減輕。Masson染色結果提示,EGCG干預后動脈粥樣硬化斑塊中膠原成分明顯增加。免疫組織化學染色發現EGCG組斑塊中巨噬細胞比例明顯降低,而斑塊中平滑肌成分顯著增高。此外,Western blot檢測發現EGCG可以顯著降低ApoE缺陷小鼠斑塊中基質金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN)的表達。同樣,明膠酶譜法結果提示EGCG組斑塊中MMP-2和-9活性較對照組明顯減低。zui后,與對照組相比,EGCG腹腔注射后,ApoE缺陷小鼠血清炎癥因子MCP-1、IL-6、TNF-α以及IFN-γ水平顯著降低。結論:本研究結果提示,綠茶多酚EGCG能夠增強高脂飲食喂養ApoE缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩定性。此外,EGCG增強斑塊穩定性的內在機制可能與其抑制多種炎癥因子、基質金屬蛋白酶誘導因子以及機制金屬蛋白酶表達有關。第二部分EGCG通過與67LR相互作用抑制巨噬細胞基質金屬蛋白酶誘導因子以及基質金屬蛋白酶-9的表達目的:大量研究資料表明在不穩定型動脈粥樣硬化破裂過程中,由單核細胞和巨噬細胞分泌的基質金屬蛋白酶誘導因子(EMMPRIN)以及基質金屬蛋白酶發揮著十分關鍵的作用。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是綠茶中zui主要的多酚類化合物,資料顯示EGCG具有多種藥理學活性并且能夠對心血管發揮保護性作用。近年來,實驗已證實相對分子量為67000的層粘連蛋白受體(67LR)為EGCG主要膜表面受體,EGCG與67LR相互作用后可發揮多種生物學效應。本研究的主要目的就是為了評估EGCG是否能夠抑制佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)誘導分化巨噬細胞 EMMPRIN 以及 MMP-9 的表達,并且探討其可能的相關機制。方法:使用不同濃度的EGCG預處理人單核細胞THP-1細胞1小時后,以佛波酯(PMA,100nmol/L)誘導48小時使其分化為巨噬細胞。實驗中使用小干擾RNA(Small-interfering RNA,siRNA)沉默EMMPRIN基因表達。實時定量熒光PCR(Real-Time PCR)測定 EMMPRIN 和 MMP-9 mRNA 表達,蛋白質印跡法(Western Blot)檢測EMMPRIN以及MMP-9蛋白表達,使用明膠酶譜法檢測MMP-9的活性。結果:研究發現EGCG(10-50μmol/L)可以明顯抑制巨噬細胞EMMPRIN以及MMP-9的表達,抑制作用呈現劑量-效應關系,隨著EGCG濃度的增加,其抑制作用明顯增強。Extracellular signal-regulated kinase 1/2(ERK1/2)、p38 以及c-Jun N-terminal kinase(JNK)信號通路與EMMPRIN和MMP-9的表達密切相關,EGCG同樣能夠顯著抑制ERK1/2、p38以及JNK信號轉導通路的激活。使用基因沉默的方法下調巨噬細胞EMMPRIN表達可以使MMP-9的表達以及活性明顯下降,提示在EGCG主要通過抑制巨噬細胞EMMPRIN合成進而抑制MMP-9的表達。為了進一步證明EGCG是否通過67LR相互作用發揮其抑制EMMPRIN以及MMP-9表達的作用,我們使用67LR抗體封閉巨噬細胞表面67LR以阻斷EGCG與67LR的相互作用,結果發現EGCG對巨噬細胞EMMPRIN以及MMP-9表達的抑制作用明顯減弱,同樣67LR抗體阻斷了 EGCG對于ERK1/2、p38以及JNK信號轉導通路的抑制作用。結論:我們的研究結果表明,EGCG可以通過抑制ERK1/2、p38以及JNK信號轉導通路的激活進而降低巨噬細胞EMMPRIN和MMP-9表達,這些生物學效應是通過EGCG與67LR相互作用介導的。另外,研究發現在EGCG抑制MMP-9表達的過程中,EMMPRIN發揮著主要作用。以上研究結果提示綠茶多酚EGCG可能成為一種穩定動脈粥樣硬化斑塊的治療劑。

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