免疫組化染色

S—P免疫組化染色試劑盒采用生物素標記的第二抗體與鏈霉菌抗生物素蛋白連接的過氧化物酶及底物色素混合液來測定細胞和組織中的抗原。
S—P免疫組化染色步驟：
1) 石蠟切片脫蠟和水化后，用PBS(pH7．4)沖洗三次，每次3分鐘(3×3’)。
2) 根據每一種抗體的要求，對組織抗原進行相應的修復。
3) 每張切片加1滴或50ul過氧化酶阻斷溶液(試劑A)，以阻斷內源性過氧化物酶的活性，室溫下孵育10分鐘。
4) PBS沖洗3×3’。
5) 甩去PBS液，每張切片加1滴或50ul的非免疫性動物血清(試劑B)，室溫下孵育10分鐘。
6) 甩去血清，每張切片加1滴或50ul的*抗體(用戶自選)，室溫下孵育60分鐘或4℃過夜，建議參閱每種抗體的說明書。
7) PBS沖洗3×5’。
8) 甩去PBS液，每張切片加1滴或50ul生物素標記的第二抗體（試劑C），室溫下孵育10分鐘。
9) PBS沖洗3×3’。
10)甩去PBS液，每張切片加1滴或50ul鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液(試劑D)，室溫下孵育10分鐘。
11)PBS沖洗3×3’。
12)甩去PBS液，每張切片加2滴或100ul新鮮配制的DAB或AEC溶液，顯微鏡下觀察3—10分鐘，陽性顯色為棕色或紅色。
13)自來水沖洗，蘇木素復染，0.1％HCL分化，0.1％氨水或PBS沖洗返藍。
14)如果用DAB顯色，則切片經過梯度酒精脫水干燥，(二甲苯透明)，中性樹膠封固；如果用AEC顯色，則切片不能經酒精脫水，而直接用水性封片劑封片。

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