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細胞成活率形態學觀察法及檢測法

更新時間:2015-12-01      瀏覽次數:1327

細胞成活率,判斷之形態學觀察法:

細胞內出現顆粒或空泡。

細胞內如果出現顆粒物質,表明細胞處于非健康狀態。

同樣,細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。
 

 細胞喪失雙折射性:

如果發生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環),則提示該細胞已經死亡,即zui終干枯死亡。

如果發生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損,甚至死亡。

怎樣去除死細胞?單層培養的細胞死亡后,一般會漂浮起來,因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞。
 

細胞成活率檢測實驗

即刻檢測實驗——染料柜染實驗:

原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞;生長液;0.25%胰酶;PBSA.非滅菌材料即:血細胞計數板;生存力染料;巴斯德吸管;顯微鏡;手執計數器。操作步驟:

1、用胰蛋白酶消化或離心,重懸制備高深度的細胞懸液

2、取一塊干凈的血細胞計數板,將蓋玻片固定在適當位置上。

3、將一<滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻/li>

4、加至血細胞計數板的計數室中。

5、靜置1~2min(但不要放置很久,否則活細胞會受到損傷而吸收染料)。

6、將計數板置于顯微鏡下,用10倍物境找到計數網格。

7、計數細胞總及著色細胞的數目。

8、清洗血細胞計數板,放入盒內。
 

實驗分析-計算未著色細胞的百分數,該數字即為本方法所得出的細胞生存力百分數。

據統計,原代培養細胞成活率一般為50%~90%。細胞系一般為90%~100%存活。凍融細胞一般為50%~80%存活

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