乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒使用詳情


產品簡介：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著 NAD+/NADH 之間互變。LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 血清（漿）樣品：直接檢測。

3. 丙酮酸鈉標準液：取 100µL 標準液，倍比稀釋至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用 2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做標準曲線。

LDH 活力單位計算：
1. 計算樣品丙酮酸的含量，即將?A 帶入回歸方程中（x），計算 y 值
2. 血清（漿）LDH 活力的計算
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。LDH（U/mL）=y×V 樣÷V 樣÷T×103=66.7×y
3. 細胞、細菌和組織中 LDH 活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。LDH（U prot）= y×V 樣÷（Cpr×V 樣）÷T×103=66.7×y÷Cpr需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/g 鮮重）= y×V 樣÷（W÷V 樣總×V 樣）÷T×103=66.67×y÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/104 cell）= y×V 樣÷（500÷V 樣總×V 樣）÷T×103=0.133×y
V 樣：反應體系中加入的樣本體積，10µL=0.01mL；V 樣總：加入的提取液體積，1mL；T：反應時間，15 min；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬；103：1µmol/mL=103nmol/mL。 

 

乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒使用詳情